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嘔吐毒素殘留快速檢測試紙條的研制

更新時間:2014-09-05      點擊次數:1322

李向梅 韓京朋 蘇麗芳等

北京維德維康生物技術有限公司,北京  100095

摘要:為研制一種用于檢測牛奶中嘔吐毒素(deoxynivalenolDON)殘留的快速檢測試紙條,試驗以人工合成抗原DON-OVA和羊抗鼠二抗為原料,包被硝酸纖維膜;以抗DON單克隆抗體為原料,制備金標抗體,并凍干保存于反應板微孔中,zui終制備出可用于檢測牛奶中DON殘留的膠體金快速檢測試紙條。結果顯示,該檢測試紙條檢測限為100 μg/L,重復性、特異性均較好,可用于檢測牛奶中DON殘留。

關鍵詞:嘔吐毒素;試紙條;牛奶

 

青貯飼料是指經人工調劑的多汁青飼料,多用于反芻動物的冬春季節飼喂,對泌乳奶牛尤為重要(白曉燕等,2011)。但青貯飼料在儲存過程中易受到霉菌毒素的污染,奶牛進食受霉菌毒素污染的飼料后,不僅會影響奶牛的生產性能,且會引起牛奶中霉菌毒素的污染,影響原料奶的安全性(王星凌等,2010;王麗芳等,2011;李笑櫻等,2012)。嘔吐毒素(vomitoxin),又稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON),是一種無色針狀結晶,熔點為151152 ,具有較強的熱抗力,121 高壓加熱25 min僅有少量破壞(王金全,2011;林少青等,2009)。DON具有很強的毒性,可導致動物腸功能紊亂,引起嘔吐、腹瀉、腹痛等癥狀,且對免疫系統也有影響,并具有明顯的胚胎毒性和一定的致畸作用,還可能有遺傳毒性(金秀娟等,2010)。1998 年,在癌癥研究機構公布的評價報告中,DON被列為3 類致癌物(封薇等,2012)。目前,針對牛奶中DON的檢測方法主要是儀器方法,免疫分析法還很少,且主要是進口產品(周思等,2011;鄭楠等,2012)。為此,本研究擬利用膠體金免疫層析法制備可檢測牛奶中DON殘留的快速檢測試紙條,用于基層進行大批量樣品的現場快速檢測,防止DON中毒事件的發生。

材料與方法

1.1  材料  DON、玉米赤霉烯酮、黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A標準品及牛血清白蛋白(BSA)均購自Sigma公司;硝酸纖維素膜(NC)、樣品墊、PVC底板、吸水紙均購自上海金標生物科技有限公司;膠體金溶液、包被抗原(DON-OVA)、抗DON單克隆抗體均由北京維德維康生物技術有限公司自制。陰性牛奶樣品均為市售(經ELISA試劑盒檢測確定為DON陰性牛奶)。

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